• 1. 1. اندازه‌گیری هورمون FSH در سرم

   

قبل از شروع آزمایش اطمینان حاصل می‌کنیم که کلیه‌ی استانداردها، معرف‌ها و نمونه‌ها به دمای اتاق (۲۸-۲۲ درجه سانتی‌گراد) رسیده‌اند. کلیه‌ی استانداردها را با سرو ته کردن به‌آرامی مخلوط می‌کنیم.

• • • تعداد چاهک‌های مورد نیاز برای انجام آزمایش را برداشته، بقیه‌ی چاهک‌ها را با چسب مخصوص پلیت پوشانده، همراه رطوبت‌گیر در کیسه‌ی آلومینیومی قرار داده، درب آن را بسته و در دمای ۸-۲ درجه‌ی سانتی‌گراد نگهداری می‌کنیم.

  ( اینجا فقط تکه ای از متن درج شده است. برای خرید متن کامل فایل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. )

• ۵۰ میکرولیتر از استاندارد و نمونه را در چاهک‌های مورد نظر می‌ریزیم. بهتر است که از هر نمونه یا استاندارد به صورت دوتایی در چاهک‌ها ریخته شود.

توجه: حتما چاهک اول به عنوان بلانک در نظر گرفته شود. در این چاهک نمونه و یا استاندارد نمی‌ریزیم. بقیه‌ی مراحل با سایر چاهک‌ها یکسان می‌باشد.

• ۱۰۰ میکرولیتر از محلول آنزیم کونژوگه به هر چاهک اضافه می‌کنیم. برای ‌مدت ۳۰ ثانیه پلیت را روی سطح میز به‌آرامی تکان می‌دهیم.

• چاهک‌ها را با چسب مخصوص پلیت می‌پوشانیم و به مدت ۶۰ (± ۱۰ دقیقه) در دمای اتاق انکوبه می‌کنیم.

• محتویات چاهک‌ها را با وارونه کردن پلیت یا آسپیره کردن خارج می‌کنیم. سپس چاهک‌ها را ۵ مرتبه و هر مرتبه با ۳۰۰ میکرولیتر محلول شستشو می‌دهیم. اگر شستشو به صورت دستی انجام شود، در انتهای شستشو به‌آرامی پلیت را بر روی کاغذ رطوبت‌گیر می‌زنیم.

• ۱۰۰ میکرولیتر از محلول آماده به‌کار رنگ‌زا درون تمام چاهک‌ها می‌ریزیم.

• مدت ۱۵ دقیقه در دمای اتاق و تاریکی پلیت را انکوبه می‌کنیم.

• ۵۰ میکرولیتر محلول متوقف‌کننده‌ی واکنش به کلیه‌ی چاهک‌ها اضافه می‌کنیم. به مدت ۲۰ ثانیه به‌آرامی پلیت را تکان می‌دهیم تا تمام رنگ آبی آن تبدیل به زرد شود.

• مقدار جذب نور را برای هر چاهک در طول موج ۴۵۰ نانومتر (از طول موج رفرانس ۶۳۰-۶۲۰ نانومتر استفاده می‌کنیم) با بهره گرفتن از روش Point to Point حداکثر تا ۱۵ دقیقه بعد از متوقف کردن واکنش می‌خوانیم.

جدول ۳-۳- مقادیر مورد انتظار برای سیستم تست FSH به روش ELISA

Normal Range

۲٫۹-۱۲ mlu/ml

Follicular Phase Female

۸-۲۱ mlu/ml

Midcycle Peak Female